马德里竞技球员名单 www.ocbqsw.com.cn 過氧化氫酶(catalase,CAT)是一種廣泛存在于生物組織中的氧化還原酶,它能催化過氧化氫(H2O2)分解為水和氧氣,清除組織中的過氧化氫。H2O2 λ 240 nm處有一個吸收高峰,其吸光度與H2O2的含量成正比,過氧化氫酶能分解H2O2,使反應溶液吸光度A240隨反應時間而降低。單位時間內吸收的差值就是過氧化氫酶的活性。

1 試劑

10.05 mol/L 磷酸緩沖液(PBS,pH 7.8

20.15 mol/L 磷酸緩沖液(PBS,pH 7.0

330%雙氧水(H2O2

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中,分三次加入6 ml2 ml、2 ml、2 ml)預冷的磷酸緩沖液(pH 7.8),在冰浴上研磨成勻漿,轉入10 ml離心管中,低溫12000 r/min離心20min,上清夜即為酶粗提液。

2.2 測定方法

1)反應混合液的配制:取100 ml磷酸緩沖液(pH 7.0)于燒杯中,加入155 μl 30%的H2O2,混勻后保存于4℃備用。

2)酶活性測定:取2.9 ml反應混合液,加入40 μl酶液(可視情況調整)后測定λ 240 nm下的吸光度,10 s測定一次,測定120 s。以PBSpH 7.0)代替酶液作為對照調零。

2.3 計算公式

以每分鐘內OD值變化(降低)0.01為一個酶活性單位(U)。按下式計算酶活性:


其中:

過氧化氫酶活性以酶單位每克鮮重每分鐘表示(U/g·min);

ΔA240為反應時間內吸光度的變化;

Vt為提取酶液總體積(ml);

Vs為測定時酶液用量(ml);

W為樣品鮮重(g);

t為反應時間(min)。