马德里竞技球员名单 www.ocbqsw.com.cn 在過氧化物酶(peroxidase,POD)催化下,雙氧水(H2O2)將愈創木酚氧化成茶褐色產物,此產物在 λ 470 nm處有最大吸收峰,故可以通過測其吸光度的變化測定過氧化物酶的活性。

1 試劑

10.05 mol/L 磷酸緩沖液(PBS,pH 7.8

20.2 mol/L 磷酸緩沖液(PBS,pH 6.0

32-甲氧基酚(愈創木酚)

430%雙氧水(H2O2

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中,分三次加入6 ml2 ml、2 ml、2 ml)預冷的磷酸緩沖液(pH 7.8),在冰浴上研磨成勻漿,轉入10 ml離心管中,低溫12000 r/min離心20min,上清夜即為酶粗提液。

2.2 測定方法

1)反應混合液的配制:取100 ml磷酸緩沖液(pH 6.0)于燒杯中,加入38 μl愈創木酚(2-甲氧基酚)于磁力攪拌器上加熱攪拌,直至愈創木酚溶解,待溶液冷后加入56 μl 30%的H2O2,混勻后保存于4℃備用。

2)酶活性測定:取3 ml反應混合液,加入35 μl酶液(可視情況調整)后測定470 nm下的吸光度,10 s測定一次,測定120 s。以PBSpH6.0)代替酶液作為對照調零。

2.3 計算公式

以每分鐘內OD值變化(升高)0.01為一個酶活性單位(U)。按下式計算酶活性:

其中:

過氧化物酶活性以酶單位每克鮮重每分鐘表示(U/g·min);

ΔA470為反應時間內吸光度的變化;

Vt為提取酶液總體積(ml);

Vs為測定時酶液用量(ml);

W為樣品鮮重(g);

t為反應時間(min)。