马德里竞技球员名单 www.ocbqsw.com.cn 當用磺基水楊酸提取植物樣品時,脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中,然后用酸性茚三酮加熱處理后,茚三酮與脯氨酸發生反應,溶液變為紅色,再用甲苯處理,則色素全部轉移至甲苯中,色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在 λ 520 nm波長下測定吸光度,即可從標準曲線上查出脯氨酸的含量。

1 試劑

13% 磺基水楊酸溶液

22.5% 酸性茚三酮溶液

310 μg/ml脯氨酸標準溶液

4)冰醋酸

5)甲苯

2 實驗方法

        2.1 標準曲線的繪制

7支具塞試管,按下表加入各試劑,迅速混合均勻后,在沸水浴中煮沸30 min,立即取出置于冰水中冷卻。冷卻后準確加入4 ml甲苯,劇烈振蕩30s以萃取紅色物質,靜置片刻后,用吸管輕輕吸取上層脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0號試管為空白對照,在 λ 520 nm下測定吸光度。以脯氨酸含量為橫坐標,以吸光度為縱坐標繪制標準曲線。


2.2 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中,分三次加入6 ml2 ml、2 ml、2 ml)預冷的3%磺基水楊酸溶液,在冰浴上研磨成勻漿后,轉入具塞試管中,在沸水浴中煮沸10 min(提取過程需經常搖動),取出置于冰水中冷卻,過濾到干凈的試管中,濾液即為脯氨酸提取液。

       2.3 測定方法

1)吸取2 ml提取液放入具塞試管中,然后加入2 ml冰醋酸和2 ml 酸性茚三酮溶液,迅速混合均勻后,在沸水浴中煮沸30 min,立即取出置于冰水中冷卻。

2)冷卻后準確加入4 ml甲苯,劇烈振蕩30s以萃取紅色物質,靜置片刻后,取上層溶液至離心管中,4000 r/min離心5 min。

3)用吸管輕輕吸取上層脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0號試管為空白對照,在 λ 520 nm下測定吸光度,通過標準曲線方程查得脯氨酸含量。

        2.4 計算公式

其中:

脯氨酸含量以以每微克每克鮮重表示(μg/g·FW);

C為查標準曲線值(μg);

Vt為提取液總體積(ml);

Vs為測定時提取液用量(ml);

W為樣品鮮重(g)。